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兔場實驗室細菌培養技術 實驗室兔籠

生活百科實驗室

細菌分離培養是兔場實驗室診斷工作中一個十分重要的步驟，通過對細菌的分離和純培養，可以根據菌落的形態、大小、結構、色澤、氣味以及有無溶血等情況進行初步鑒定，然后通過進一步的染色鏡檢或者是特殊培養進行鑒定或研究，為病原的確診提供依據 。
1．培養基制備培養基是細菌學檢查過程中非常重要的材料，它含有細菌生長所必需的營養物質，細菌經過培養基的純培養，才能夠進行準確的檢查，得到可靠的結果 。
(1)肉水的制作：
①材料：瘦牛肉500克，蒸餾水(或常水)1000毫升 。
②方法：取瘦牛肉除去脂肪、肌腱，切成碎塊或絞碎，按1千克牛肉2千毫升水的比例，加水浸泡一夜，煮沸一小時，用紗布初步濾去肉渣擠出肉水，再用濾紙濾過，補足原有水量，裝入燒瓶中置高壓滅菌器中120℃20分鐘滅菌，制成肉水 。
制作肉水的另一種方法是：取牛肉浸膏0.5-1.0克，加蒸餾水100毫升，加熱溶解，濾紙濾過，并同上述方法進行滅菌即成 。
③用途：制作各種培養基的基礎 。
(2)營養肉湯：
①材料：肉水1000毫升，蛋白胨IO克，氯化鈉5克 。
②方法：將蛋白胨和氯化鈉加入肉水中，稍加熱溶解，用氫氧化鈉溶液調整pH值為7.4-7.6之間，再加溫使溶液均勻 。濾過分裝后高壓滅菌備用 。
③用途：可供一般的細菌生長需要，檢查細菌的生長表現，也可作為制作固體培養基的基礎 。
(3)營養瓊脂：
①材料：營養瓊脂粉40克，蒸餾水1000毫升 。
②方法：將營養瓊脂粉加入蒸餾水中，攪拌浸泡1小時，加熱使充分溶解，高壓滅菌備用 。
③用途：分離細菌純培養及作為其他特種培養基的基礎 。
(4)血液瓊脂培養基：
①材料：脫纖維血5-10毫升，營養瓊脂100毫升 。
②方法：準備好滅菌并有玻璃珠的三角燒瓶，無菌采集血液，注入三角燒瓶中，不停地搖動，直至血纖維分離為止，一般需要10分鐘 。
高壓滅菌好的營養瓊脂融化后，冷卻至55-60℃時加人脫纖維血液，注意必須確保無菌操作，加入血液后輕輕搖動，不使產生氣泡，立即倒人無菌平皿或分裝于滅菌試管中備用 。
③用途：觀察細菌的溶血情況，有些細菌的初次分離時需要此種培養基 。
(5)厭氧肝片肉湯：
①材料：營養肉湯，動物肝塊或肉渣，液體石蠟 。
②方法：利用作肉湯的碎肉塊、肉渣或者是動物肝臟少許，分裝于試管中加營養肉湯5毫升，上層加液體石蠟0.5-1.0毫升．120℃20分鐘滅菌備用 。
③用途：厭氧菌的培養 。
(6)麥康凱瓊脂：
①材料：麥康凱瓊脂粉38克，蒸餾水1000毫升 。
②方法：將麥康凱瓊脂粉加入蒸餾水中，攪拌浸泡l小時，加熱使充分溶解，高壓滅菌備用 。
③用途：常用作大腸桿菌類細菌的分離培養 。
2．細菌接種方法
(1)平板劃線接種法：平板劃線接種法是細菌分離培養中最常用的方法，能使細菌分散生長，形成單個菌落 。左手持培養皿，用拇指、食指及中指將平皿揭開，角度不要超過20度，右手拿接種環，接種環與瓊脂表面約呈45度角 。取少許病料涂布于培養基邊緣，火焰滅菌接種環，冷卻后輕觸培養基邊緣的病料區，并向一邊劃出橫線，可以連續劃出一個小區，火焰滅菌接種環，冷卻后將平皿轉換角度，從第一個小區再向外劃出一個小區，以后再按照同樣方法分區將平板劃滿，注意只能在起始部位與前一個小區交叉 。
(2)瓊脂斜面接種法：本方法多用于菌種的保存，也可以用于細菌的分離 。左手持斜面培養基，右手持接種環，火焰滅菌冷卻后挑取所需的菌落，以右手小拇指夾住棉塞或膠塞，輕轉后取出，注意不要污染，立即將管口和塞子火焰滅菌，將接種環伸入試管內，自斜面底部向管口方向劃曲線，再經火焰消毒管口和塞子后蓋嚴，進行培養 。

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